要保證空氣微生物采樣器樣本處理過(guò)程的準(zhǔn)確性，核心在于“全程無(wú)菌控制、減少微生物損失、規(guī)范操作流程”，從樣本轉(zhuǎn)移到結(jié)果計(jì)算的每個(gè)環(huán)節(jié)都需嚴(yán)格把控。以下是具體要點(diǎn)：
一、樣本轉(zhuǎn)移：避免污染與損失
樣本從采樣器轉(zhuǎn)移至處理容器（如培養(yǎng)皿、離心管）時(shí)，需同時(shí)防范外界污染和目標(biāo)微生物的損耗：
無(wú)菌環(huán)境操作：
轉(zhuǎn)移需在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，操作前用75%酒精消毒采樣器采樣頭、容器表面及操作者手部；使用無(wú)菌吸管、移液槍（槍頭需滅菌），避免接觸非無(wú)菌區(qū)域（如容器外壁）。
誤區(qū)提示：若在開(kāi)放環(huán)境操作，空氣中的雜菌會(huì)混入樣本，導(dǎo)致菌落數(shù)虛高，尤其對(duì)低濃度樣本影響顯著。
采樣液的充分洗脫：
對(duì)于撞擊式、篩孔式采樣器，采樣后需用無(wú)菌洗脫液（如0.85%無(wú)菌生理鹽水、磷酸鹽緩沖液PBS）反復(fù)沖洗采樣頭（至少3次），確保附著的微生物完全進(jìn)入洗脫液；渦旋振蕩1~2分鐘（轉(zhuǎn)速2000~3000rpm），打破微生物聚集的菌團(tuán)，提高分散度。
二、樣本稀釋：保證稀釋倍數(shù)的精準(zhǔn)性
當(dāng)樣本中微生物濃度較高時(shí)，需梯度稀釋以獲得可計(jì)數(shù)的菌落數(shù)（30~300CFU/皿），稀釋過(guò)程的誤差會(huì)直接影響結(jié)果準(zhǔn)確性：
稀釋液與容器：使用滅菌的梯度稀釋管（如10mL容量的螺旋蓋試管），預(yù)裝9mL無(wú)菌稀釋液（誤差需≤±0.1mL）；標(biāo)記清晰稀釋倍數(shù)（10?¹、10?²等），避免混淆。
操作規(guī)范：
移液時(shí)確保吸管/槍頭尖端接觸液面下1~2cm，避免吸入氣泡；
從高濃度向低濃度稀釋時(shí)，每一步均需混勻（用手搓動(dòng)試管10~15次），確保稀釋均勻；
同一稀釋倍數(shù)做2~3個(gè)平行樣，減少隨機(jī)誤差。
三、培養(yǎng)與計(jì)數(shù)：控制培養(yǎng)條件，規(guī)范計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)
微生物的生長(zhǎng)受培養(yǎng)條件影響極大，需嚴(yán)格統(tǒng)一參數(shù)：
培養(yǎng)基選擇與制備：
根據(jù)目標(biāo)微生物類(lèi)型選擇培養(yǎng)基（如檢測(cè)細(xì)菌用營(yíng)養(yǎng)瓊脂，真菌用馬鈴薯葡萄糖瓊脂PDA），培養(yǎng)基需滅菌徹底（121℃高壓蒸汽滅菌20分鐘），且pH值符合要求（細(xì)菌pH7.2~7.4，真菌pH5.6~5.8），避免因營(yíng)養(yǎng)缺陷或酸堿不適導(dǎo)致微生物無(wú)法生長(zhǎng)。
培養(yǎng)條件控制：
溫度：細(xì)菌36±1℃，真菌28±1℃，恒溫培養(yǎng)箱需每日校準(zhǔn)溫度（誤差≤±0.5℃）；
時(shí)間：細(xì)菌培養(yǎng)48±2小時(shí)，真菌培養(yǎng)72±2小時(shí)，避免培養(yǎng)過(guò)短導(dǎo)致菌落漏計(jì)或過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致菌落重疊。
計(jì)數(shù)規(guī)則：
選擇菌落數(shù)在30~300CFU的平板計(jì)數(shù)（低于30則結(jié)果誤差大，高于300則菌落易重疊）；
若同一稀釋度的平行平板菌落數(shù)差值超過(guò)1倍（如10?³稀釋度平板菌落數(shù)為20和50），需重新檢測(cè)；
計(jì)數(shù)時(shí)需區(qū)分目標(biāo)微生物與污染菌（可通過(guò)菌落形態(tài)、染色鏡檢輔助判斷）。
四、質(zhì)量控制：全程驗(yàn)證可靠性
空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)：
每批樣本處理時(shí)，設(shè)置采樣空白（采樣器不采集空氣，僅用洗脫液沖洗采樣頭后培養(yǎng)）和操作空白（直接將無(wú)菌洗脫液接種培養(yǎng)），若空白菌落數(shù)>5CFU，說(shuō)明存在污染，需重新實(shí)驗(yàn)。
陽(yáng)性對(duì)照與回收率驗(yàn)證：
定期用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)菌液（如大腸桿菌、金黃色葡萄球菌）模擬采樣，計(jì)算回收率（回收率需在70%~130%之間，否則需檢查采樣器效率或處理流程）。
儀器校準(zhǔn)：
采樣器需定期校準(zhǔn)流量（誤差≤±5%），避免因流量不準(zhǔn)導(dǎo)致采樣體積偏差；
移液槍、培養(yǎng)箱等設(shè)備需每年經(jīng)計(jì)量認(rèn)證，確保參數(shù)準(zhǔn)確。
